viernes, 18 de julio de 2008

protocolo aislamiento vesiculas y arbusculos



El suelo es esencial para el desarrollo de la vida, como lo es el aire y el agua, y cuando es utilizado de manera sensata puede ser considerado como un recurso renovable. Es el principal enlace entre los factores bióticos y abióticos y es el hábitat de las plantas.
Desde un punto de vista ecológico el suelo es el subsistema de los ecosistemas terrestres en donde se realiza principalmente el proceso de descomposición, fundamental para la obtención y reciclado de nutrientes que aseguren el proceso vital de la producción. Estos procesos son realizados por una gran cantidad de microorganismos que se encuentran en el suelo. Unos de los organismos mas influyentes son los hongos formadores de micorrizas las cuales cumplen una función esencial en el ecosistema terrestre, desempeñando una serie de funciones fundamentales para la salud de muchas plantas y cultivos. La función del hongo es colonizar biotróficamente la corteza de una raíz determinada, sin causarle daño alguno, además de que se integra llegando a formar parte de ella. A su vez, el hongo también coloniza el suelo que rodea la raíz mediante su micelio externo, de manera que ayuda al huésped a adquirir nutrientes minerales y agua.
Con este laboratorio se pretende analizar y entender de manera mas profunda estos microorganismos los cuales son esenciales para el desarrollo de procesos agrícolas amigables con el ambiente


OBJETIVO

Identificar las diferentes estructuras de las micorrizas en muestras de suelo local, mediante la aplicación de técnicas de laboratorio estándar.

PROCEDIMIENTO Y DESARROLLO

Para el desarrollo de la práctica, se realizó el muestreo en la granja del SENA, escogiendo suelos correspondientes a cultivos de maíz y lechuga, caracterizados por ser abonados previamente con micorrizas.

PROCEDIMEINTO DE TINCIÓN DE RAICES EN LABORATORIO
Se lavan las raíces finas o delgadas con agua para colocarlas en tubos de ensayo donde se le adiciona KOH al 10% cubriendo totalmente las raíces, conjuntamente se prepara el baño de María a una temperatura de 90°C donde se depositan por 15 minutos los tubos de ensayos con las raíces y el KOH, después se lava con agua e inmerso en una solución de KOH + H2O2 al 10% por un periodo de 10 minutos, se lava nuevamente con agua en una caja petri para acidificar en con una solución de HCl (Se preparación una solución de 10% de HCl con H2O2 ), se decanta sin lavar, para luego adicionar azul de metileno para su tinción con tiempo y lavado posterior con H2O2.
Se hiso un montaje de una lamina con raíces con una gota de glicerina y se hiso la observación bajo microscopio la cual se aprecio.


MATERIALES:
tubos roscados falcón de 10 ml
baño María
beakers

REACTIVOS:
peroxido de hidrogeno al 10% (H2O)
acido clorhídrico 1 N
lacto glicerol
azul de Tripan 0,05%


PROCEDIMIENTO

Al tomar la muestras de suelo se colectaron raices de plantas, lechuga Lactuca sativa L,entre otras a continuación se lavaron las raíces con agua corriente para retirar el exceso de tierra y se escogieron las raíces mas delgadas y finas para la tinción.






Posteriormente estas raíces se colocaron en tubos de ensayo y se les adiciono hidróxido de potasio KOH al 10% hasta cubrir las raíces totalmente. Seguidamente los tubos de ensayo se llevaron a baño maría a 90ºC durante 15 minutos y se lavaron con agua en un tamiz de 100 micras




A continuación se realizo la inmersión en solución de KOH al 10% y H2O2 al 10% mezclados 1:1 (V/V) por 10 minutos, posteriormente se retiraron las raíces de la solución y se lavaron, a estas raíces se le adiciono ácido clorhídrico HCL 1.1N durante 10 minutos






Se decanto el HCl sin lavar, adicionado a estas muestras azul de metileno y se colocaron al baño María por 10 minutos. Inmediatamente se lavaron las raíces en agua destilada y se dejaron en reposo por 8 días a temperatura ambiente.







En la semana siguiente se montaron 10 raíces de más o menos 1 cm de largo en láminas con una gota de glicerina y se observaron al microscopio

Se llevo a cabo un conteo de campos colonizados y se utilizo la siguiente formula para obtener el porcentaje MIC

(n campos micorrizados) X 100
% MIC =-------------------------------------------
(n total de campos observados)





OBSERVACIONES
ejemplo :El montaje que se realizo se observo que la lamina que contenida las raíces micorrizadas de la yuca arbúsculos en un 100% de los campos observados, caso contrario en la raíces que no fueron micorrizadas que se detecto ningún órgano de hongos micorrisicos.
OBSERVACION DE RAICES YUCA SIN MICORRIZAS

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